【案例】核酸检测实验室污染的快速排查与处理

第一步：如何判断实验室出现污染

最简单的判断方法就是，当你设置的阴性对照都有了曲线，说明实验室出现了污染。如下图1，阴性对照的Ct值为31，且有明显S型曲线。

图1：某次污染的试验结果

特别说明：实验室在加样时，使用试剂盒自带的阴性对照，仅能监控试剂是否存在污染，如果同时设置无模板对照（纯化水）和试剂盒阴性对照，可对试验的全过程和试剂分别监控。

第二步：污染区域排查

2.1.首先在试剂准备间配置几个阴性对照，上机扩增；如果此时的阴性对照没有曲线，说明试剂没有被污染，可以继续使用；如果出现了曲线，说明试剂准备间已经被污染，请另外准备一套耗材、试剂盒，在一个新房间或者区域，重新配置阴性对照，直到阴性对照没有曲线，证明配液不存在问题。

2.2.全面采样，使用湿棉签，对实验室不同房间的各个区域进行采样，样本处理间：离心机盖、移液器、工作台面、地面、门把手等等；PCR扩增间，PCR仪器表面、电脑键盘、鼠标、桌面地面等等。

2.3.棉签加入500ul纯水后，离心取上清，加入体系，上机。

2.4.结果分析，不同区域的结果不同，所采集区域Ct值越低，说明污染越严重，是污染源头。

图2：污染区域采集样本检测结果

说明：其中Ct值最小的样本来源于离心机，其他有曲线的样本分别来源于试验台面、PCR仪器、电脑键盘、鼠标、实验室门把手等。

第三步：污染处理

3.1.污染严重区域的处理，在确定污染源和污染区域后，使用二氧化氯对污染最严重的区域进行擦拭或清洗（注：二氧化氯有腐蚀性，擦拭后半个小时尽快用水清洗干净）。擦拭与清理3次后，对污染区域再次采样，检测，直到结果都为阴性为止。（最好使用有内参作为试验成功的参照，部分消毒剂或环境杂质对PCR有影响，在没有内参的情况下，即使核酸浓度很高，也没有扩增曲线，判为阴性，误以为污染已经清理干净）
3.2.不严重区域的处理，当最严重的区域污染处理完后，再使用二氧化氯处理其他不严重区域（先处理污染最严重区域的原因是以免人为扩大污染面）。

第四步：其他注意事项

4.1.移液器造成的污染，可能导致整个试剂盒的污染，移液器污染排查方法是：取 500μL水，用移液器（不带吸头），反复吹吸N次后，从500μL水中取样进行检测，出现曲线，说明存在污染，反之。
4.2.被污染的试剂盒，并非没有使用价值了，可以将其当作污染区域排查试剂，用于调查污染最严重区域。污染源的核酸浓度高于其他区域，其Ct值要远低于其他区域，使用被污染的试剂盒即可。（个人经验，供参考）
4.3.编者团队所处理的污染中，以阳性对照污染、核酸产物污染和阳性样本污染最为常见；其中阳性对照污染主要是因为加阳性对照没有固定移液器、离心阳性对照等引起；核酸产物污染主要以八联管没有盖紧或因其他因素被打开，导致外泄，反应液在反应孔被蒸发而引起；阳性样本的污染主要为没有勤换手套，离心板架没有清洗等操作不合格而引起。实验室对工作人员相关操作进行严格规范，对每一步可能导致实验室污染的操作都严格按照标准规范进行，是可以减杜绝实验室污染的。

4.4.不建议对荧光定量设备的孔位进行强氧化剂的消毒。强氧化剂消毒剂可能腐蚀孔位，对荧光的采集造成严重影响。下图为某实验室出现污染后，实验室人员对设备孔位喷洒84消毒液，导致该设备孔位因此腐蚀，出现故障。